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学会正确地进行细胞培养是细胞实验的基础，养好细胞是很多实验成功的关键。
然而，对于养细胞的人来说，真的是不想看到细胞的污染。
细胞的污染将直接导致实验材料的不纯净，造成数据的错误，及后续实验结果的不可靠。
因此，细胞的污染一旦出现，往往代表着实验按下暂停键，又要重复进行前面的细胞获取和培养实验，很可能几个月的埋头苦干就此白费。
细胞培养中的常见污染
细胞污染是一个很广的范围，微生物的种类更是各种各样，不同的污染的原因不同处理也不同，因此掌握对常见细胞污染的识别至关重要。
细胞培养中常见的生物污染类型有细菌污染、支原体污染、黑胶虫污染、真菌污染、病毒污染以及交叉污染等污染。
每一种污染都有各自的特点。如细菌和霉菌增殖迅速，短时间就对细胞造成明显伤害；而支原体和病毒对细胞的影响则是一种缓慢长期的过程。
污染的预防
微生物污染在细胞培养中是非常常见的，也是令人头大的一件事情。而预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法。只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到最小程度。
根据统计培养细胞产生的污染源，常常来自于不洁的环境和不规范的实验操作，比如受污染的培养基、试剂或仪器。因此，一般预防可从以下几方面着手：
（1）在培养液中添加抗生素。
可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素）。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。
（2）从消毒灭菌着手
①细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。
玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒：1)高压蒸汽灭菌15分钟以上；2)干烤消毒140℃ 2小时以上。
培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验：将血清按10%加入培养基内，用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天，肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置4℃保存。
消化液(pH7.8)或其它加入液，应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌，分装成置-20℃保存。
②操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。
定期清洗或更换超净台过滤膜、预滤网。
CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方，应1-2个月对培养箱定期进行清洁消毒。先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2-3次，用双蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，最后紫外灯照射1h以上或进行高温高压灭菌处理。水盘内加入无菌水（应每周更换），待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞。
在细胞间内准备专用的仪器如离心机，移液器，水浴锅等，并定期进行消毒，减少细胞污染的可能性。
③实验环境的彻底消毒
甲醛熏蒸法：甲醛是一种广谱灭菌剂，其水溶液和气体对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。
实验环境紫外照射 15~30 min 灭菌
（3）规划实验操作
虽然，养细胞的步骤很简单无非是换液、传代、冻存、复苏。但是具体有好多小细节需要注意....
进入实验室环境时，佩戴好口罩及手套，穿上洁净实验服，避免灰尘或唾液进入培养物中。
超净台用紫外灯照射30-60min，并开启超净台风机运转5-10min，然后用75%酒精球擦拭超净台台面，再开始实验操作。
进入超净台前应用75%酒精对双手及手腕进行全面擦拭，确保除菌完全。
实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内。生物安全柜和超净工作台里的东西能少尽少。东西过多会干扰气流，反而更不安全，并且在物品的摆放要有一定的顺序分区要规划好。这样细胞在生物安全柜或者超净台才能安全。
操作动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要说话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。
操作时小心取用无菌物品，应避免污染。勿碰触吸管尖头，不小心碰触后应立即更换；手及物品不要在暴露的瓶口上方来往，容器打开后，倾斜45度操作，操作完成后及时盖上瓶盖。
操作时要常更换吸管，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。
实验用品用完应移出超净台，以利于空气流通。
实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。
（4）防止细胞交叉污染
在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基，避免细胞间的交叉污染。
每次操作最好只处理一种细胞，多种细胞多种操作一起进行时易发生不同细胞间的污染；
在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。
（5）所有新购入或接入的细胞，必须及时保种冻存，一旦发生污染可重新复苏细胞，继续培养，这是抵御污染最直接有效的办法。
养好细胞的方法就一种，就是细心，在操作上下功夫
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